1.1 穿梭实验分析系统介绍:穿梭箱可以定量描述实验动物的主动回避反应等行为特征,是评价啮齿动物学习记忆能力最常用的行为测量工具。虽然在学习记忆、认知神经科学、神经生理学、神经药理学,特别是神经退行性疾病等领域,利用穿梭箱研究认知功能的报道很多,但如何减少实验的盲目性,有效利用穿梭箱,保证研究结果合理可靠的报道却很少。本文利用国内广泛使用的穿梭实验视频分析系统,全面考察了大鼠和小鼠学习记忆的形成和保持规律,旨在为今后类似研究提供参考。
穿梭箱实验分析系统,型号:XR-XC105,上海欣软
1.2 实验步骤
实验开始时首先设定实验参数,包括安全期(非条件刺激与条件刺激之间的间隔时间)、条件刺激(高频率的稳定声音刺激或者闪光灯强光刺激)时间、非条件刺激(电击)时间及强度、穿梭次数等。在记忆获得阶段首先把实验鼠放入左侧室,接近并面向端壁,适应5min后开始训练。
穿梭实验视频分析系统按照预先设定好的程序,先给一个可以察觉的条件刺激,持续一定时间后,如果实验鼠仍停留在同侧,则再给一个非条件刺激。动物受到电击后将从圆洞逃至对侧一定时间后,对侧再给予条件和非条件刺激,如此反复。每只鼠连续训练10d,每天穿梭几十次。一次穿梭训练结束后,间隔一定时间开始下一次训练。
1.3 实验记录指标
经过反复训练后,只给条件刺激,动物即逃到对侧安全区以逃避电击,此即形成了条件反射或称主动回避反应。全部训练结束后,计算机显示出每次穿梭的轨迹,记录大(小)鼠的:
以AAR作为其学习记忆成绩的主要评价指标,并计算主动回避反应率(rateofAAR,ROA,即主动回避反应次数AAR占穿梭总数N的百分比),统计ROA>0.75(达标)的动物的百分比。
穿梭箱实验分析系统,型号:XR-XC105,上海欣软
1.4记忆获得实验
1.4.1不同条件刺激和条件刺激时长对KM小鼠记忆获得的影响KM鼠32只,随机分为3组。SG5s组:11只,给予声光刺激5s,安全期5s,交流电(0.3mA)击5s;G5s组:10只,给予光刺激5s,安全期5s,交流电(0.3mA)击5s;G10s组:11只,给予光刺激10s,安全期5s,交流电(0.3mA)击5s。每组连续训练10d,每天1次,每次穿梭30次。训练成绩用AAR表示。统计训练10d中动物的达标(ROA>0.75)百分率,比较训练d7两组间动物AAR的差异。
1.4.2鼠种对于大鼠记忆获得的影响实验分2组,Wistar组:Wistar大鼠10只,给予声光刺激10s,安全期30s,交流电(0.7mA)击10s;SD组:SD大鼠10只,刺激条件同Wistar组。每组连续训练10d,每天1次,每次穿梭20次。统计评估指标同“1.4.1”。
1.4.3训练时辰对于大鼠记忆获得的影响Wistar大鼠19只,随机分为2组。W-day:10只,白天训练;W-night:9只,夜晚训练。两组均给予声光刺激10s,安全期30s,交流电(0.7mA)击10s。每组连续训练10d,每天1次,每次穿梭20次。统计评估的指标同“1.4.1”。
1.5记忆保持实验
1.5.1KM小鼠记忆保持情况考察KM小鼠70只,按照“1.4.1”中G10s组的实验条件连续训练14d,每天1次,每次穿梭30次。选取ROA>0.75的小鼠36只,用同样的训练方法再连续训练3d。取其AAR的均值作为小鼠记忆获得成绩(0day)。然后随机分为6组,每组6只,分别用于考察间隔2、4、6、11、14、21d后记忆保持情况,以AAR作为记忆保持成绩评估指标。1.5.2Wistar大鼠记忆保持情况考察Wistar大鼠40只,按照“1.4.2”中的实验条件连续训练14d,每天1次,每次穿梭20次。选取ROA>0.75的大鼠30只。用同样的训练方法再连续训练3d。取其AAR均值作为大鼠记忆获得成绩(0day)。然后随机分为6组,每组5只。分别用于考察间隔1、3、5、8、18、28d后的记忆保持情况,以AAR作为记忆保持成绩评估指标。
1.6统计学分析 所有实验数据以x珋±s表示,组内显著性检验用t检验;组间显著性检验用ANO-VA。
整编文章于鲁燕侠等老师所发表《不同实验条件对穿梭箱系统研究大、小鼠学习记忆行为学的影响》
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