1. 适合惯用右手的超净台试剂布局
2. 对于新细胞心需要观察摸索最适的消化温度和时间，细胞间隙明显，大片脱落可移动即可终止消化。有些细胞消化后不会变圆形，半沙状即可；
3. 消化后需要轻轻拍打细胞壁面，震落细胞；
4. 离心速度不宜过大，1000rpm/min比较适宜
5. 离心后2 mL重旋，呈云雾状散开即可，吹散次数过多影响细胞活力，建议熟练操作；
6. 种板需一步完成，不可补加；
7. 长时间培养实验，最外圈应空出来，加入PBS或空白/阴性对照，以防培养基蒸发引起的边缘效应；
8. 把从液氮或-70℃水箱中取出的细胞在最短的时间内放入水浴锅中进行解冻。
9. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜（DMSO）浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少其对细胞的损伤。如果冻存液的浓度是10％ DMSO，那么加10 ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。但培养基越少细胞越容易贴附。
10. 血清为混合物，不同品牌/批次存在差异，不同细胞适用血清品质存在差异，应做好细胞试用筛选工作，再囤积足够量；胎牛血清在-20℃保存可达5年。
11. 血清灭活处理：4℃溶解，置于56℃ 30 mins.如果血清灭活后有纤维蛋白析出，属正常现象；
12. 使用抗生素前，查询细胞相关培养特性，根据污染类型的鉴别，有针对性的处理；
13. -80℃冻存效果有限，根据研究需求，合理冻存，半年以上实验建议液氮冻存一批；
14. 根据不同的细胞类型选择冻存的细胞密度。必要的实验进行细胞最佳冻存密度测试。
典型的细胞冻存密度：1-10 ✕ 10^6 Cells/mL；
细胞长期高密度生长（长到90%-100%），更容易老化。且对数期细胞增殖速度快，容易聚团漂浮。应更具研究需要和细胞生长特性优化传代密度。
15. 细胞一旦分化/老化，很难逆转，无法通过外界营养体系和生长条件的改变“起死回生”。
16. 小心取用无菌实验物品，勿碰触吸管尖头部或容器瓶口，也不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
17. 每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同也不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75%酒精擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
18. 离心管、冻存管等容器需用抗酒精的标记笔标示内容物名称、操作日期、操作人员姓名。若是细胞传代培养，更需注明目前的代数，以及这是同一代中的第几盘。
19. 常用的生物安全柜应定期用75%酒精对内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化；二氧化碳培养箱用75%酒精喷洒消毒后擦干（每月一次）；增湿盘换水（2周1次），蒸馏水漂洗后无纺布或纸擦干，用75%酒精喷洒消毒后擦干，可按比例添加Aquaguard-2支原体预防试剂（最好预热至37℃）。显微镜、离心机也应定期擦拭。
20. 在开始养细胞并传代时，也要特别注意冻存细胞，以保持细胞有种子库存在，可以有效避免细胞损伤。
21. 胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的癌组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。
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