天能VE-586|湿转和干转,哪种方法更适合您的蛋白实验?

天能VE-586|湿转和干转,哪种方法更适合您的蛋白实验?

首页休闲益智堆叠三明治更新时间:2024-07-28
湿转和干转,哪个方法更好

对于一个完美的westernblot实验,蛋白在聚丙烯凝胶中根据天然分子量进行分离,蛋白被很好的从凝胶上转移到固相支持物上,然后通过特异性的抗体进行免疫检测。

对于转印来说,使用湿转的方法是比较好的,因为凝胶和膜都能够完全浸没在转印buffer中,在半干转的条件下,转印是在两个电极板之间发生,这种类型的转印装置可能影响蛋白的转印效率和膜上的截留能力。对于优化蛋白的转印条件,每个系统的优缺点都应该考虑进去。

湿转

对于一个湿转过程,要建立一个三明治结构,顺序为海绵,滤纸,膜,胶,滤纸,和第二个海绵。在组装之前,需要将所有部分(包括胶)放在转印buffer中进行平衡,然后将堆叠的三明治结构用转印夹夹起来放在转印装置上,连上电极装置,蛋白在转印buffer中从胶上转移到膜上。大多数western blot实验应用都可以使用湿转。

半干转

对于半干转来说,也需要进行堆叠组装(滤纸,胶,膜需要放在转印buffer中进行预平衡)放在装置电极板的底部,盖上上极板,高强的电流通过三明治结构,转印速度较快,一般小于1h。

转印的注意事项

1.当准备转印buffer时一定要注意:小组分的不一致都可能影响转印

2.使用高质量,纯度高的甲醇溶液,如果甲醇质量不佳,会影响转膜的效率

3.不要稀释转印buffer

4.不要调整转印buffer的PH值

5.为了得到最佳的转印,buffer要使用新的

6.装置保持干净

7.使用一定厚度的胶(0.5-0.75)

8.如果使用PVDF膜,膜在转印之前需要在100%甲醇中进行浸泡

9.转印垫,滤纸,胶和膜需要在转印buffer中平衡至少15min

10.在转印的时候要将膜和胶之间的空泡赶走

11.确定电极是否连接正确,避免不必要的损失

12.使用预染的分子量marker,来监控转印

13.对于难转印的蛋白,可以调整甲醇和SDS的浓度,SDS能够提升蛋白从胶上的迁移而抑制与膜的结合。甲醇能够促进蛋白和膜的结合,但是阻碍蛋白从胶上的迁移。

14.天能VE-586 转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置。专用开启式转移胶架,操作简便。配备两块槽内蓝冰盒,可提前预冷置于槽内,在转移电泳过程中起降温作用,冰盒可反复使用,方便环保。创新设计,同时可以转印四块凝胶,做到一槽多用,可节省实验空间和经费。

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