PCR实验室又叫基因扩增实验室,PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。这是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,研究人员能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。
PCR检测方法具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品起始量要求低等优点,因此被临床医生广泛认可,已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的病原微生物诊断。
其实,PCR实验室的功能极其强大,定性分析和定量检测是它最大的两个应用方向。那除了大众所了解的新冠核酸检测,我们“万能”的PCR实验室还能做些什么呢?
今天,班长给大家整理出PCR实验室可以开展的检验项目,看完记得收藏哦!
01病原体测定
PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于早期PCR技术假阳性率太高,只要有微量病原体存在就会得到阳性结果,但这并不能作为诊断依据,只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。
因此,对模板准确定量显得特别重要,应用荧光技术PCR就能够快速、准确地得到结果。对于解决免疫学检测的“窗口期”问题,判断疾病是否处于隐性或亚临床状态,以及抗体检测不能判定是现症感染还是既往感染时,均可利用PCR进行确定。
示例:新型冠状病毒核酸检测
方法学:荧光PCR法
用途:用于体外定性检测新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别。
检测基因:新型冠状病毒(2019-nCoV)ORFlab和N基因、E基因。
标本类型:上呼吸道标本:咽拭子、鼻拭子;下呼吸道标本:呼吸道抽取物、肺泡灌洗液样本、肺组织活检标本。
检测流程:
(1)核酸检测前的生物安全防护(工作人员个人三级防护的穿戴)→(2)样本的灭活(56℃灭活30分钟)→(3)样本的核酸提取(手工、核酸提取仪)→(4)PCR体系的配制和模板加样→(5)上机检测及结果分析→(6)检测后的消毒。
其他病原体检测:HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族链球菌等。
适合开展的医院和科室:儿童医院、妇幼、儿检所、第三方、各种级别的有需求的医院。
02遗传病检测
基因突变和拷贝数变异是遗传病发生的主要遗传学基础,也是遗传病检测的主要靶标。遗传病的复杂性伴随着基因突变数目多、类型广;基因拷贝数变异不仅表现为缺失和复制,而且缺失位置、大小以及复制倍数都呈现多样性。遗传变异的复杂性为遗传病的临床检测提出了技术挑战。利用荧光标记或熔点分析,可以在单个反应管内检测多个靶标。
示例:人Y染色体AZF区微缺失检测
方法学:荧光PCR法
用途:本产品用于定性检测男性全血样本中 Y 染色体无精子症因子。(azoospermia factor,AZF)区域是否存在缺失,具体检测缺失位点为:AZFa:sY84、sY86;AZFb:sY127、sY134;AZFc:sY254、sY255;AZFd:sY145、sY152。
临床研究表明,Y 染色体 AZF 区(AZFa, AZFb, AZFc, AZFd)不同程度的缺失可导致男性的少精症、无精症或精子畸形等症状,从而导致男性不育。该检测法可辅助诊断不孕不育患者的病因分析,检测结果仅供临床参考,不能单独用做确诊或排除病例等临床诊断的依据。
标本类型:全血
检测流程:
(1)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(2)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(3)加样(在标本制备区完成)→(4)PCR 扩增(在扩增区完成)→(5)结果分析与判定。
其他同类项目:地贫、耳聋、苯丙酮尿症(PKU)、蚕豆病(G6PD)、脊髓型肌萎缩(SMA)、进行性肌营养不良(DMD)、强直性脊柱炎(HLA)、血友病等。
适合开展的医院和科室:妇幼、第三方、各种级别的有需求的医院。
03个性化用药
药理学和药物基因组学的发展,阐明了药物代谢和效应个体差异的遗传本质,药物异常反应主要是因为药物代谢酶基因变异而导致酶活性异常,进而导致服药后体内药物未能被正常代谢、消除而排出体外,使得体内药物浓度过高或过低,达不到理想的治疗效果。
这种异常药物反应,可通过检测与患者所服用药物相关的遗传基因,调整药物剂量或寻找替代药物,最大程度地制定出更合理、有效、经济的药物治疗方案。
示例:心血管个体化用药指导检测:CYP2C19基因突变检测试剂盒、CYP2C9基因突变检测试剂盒、ALDH2基因突变检测试剂盒、MTHFR基因突变检测试剂盒。
方法学:荧光PCR法
用途:氯吡格雷、华法林、硝酸甘油及叶酸均为心血管临床上常见的药物,心血管用药指导分子生物学检测,明确基因分型,药学部临床药师根据检测结果,并综合考虑患者自身因素、临床诊断以及联合用药等相关信息,为临床出具个体化用药建议。
标本类型:全血(本试剂盒无需提取DNA,加样直接PCR)
检测流程:
(1)配制反应体系(在样本准备区完成)→(2)直接加入全血(在标本制备区完成)→(3)PCR 扩增(在扩增区完成)→(4)结果分析与判定。
其他同类项目:他汀类用药(ApoE)、β受体阻滞剂(ADRB1)、儿童安全用药、肿瘤靶向化疗个性化用药(EGFR、kRAS)类。
适合开展的医院和科室:心血管医院、肿瘤医院、第三方、各种级别的有需求的医院。
04肿瘤研究
肿瘤是危害人类健康的一种疾病,它的恶性程度与预后判断主要依靠是否有转移和病理切片分期。随着分子生物学的迅猛发展,肿瘤研究领域的大量研究成果显示,肿瘤的发生、发展、治疗和预后与肿瘤细胞内部基因和肿瘤相关病毒有关。很多原癌基因与抑癌基因的表达情况的检测都揭示了癌变的可能性,而PCR方法可以解决此类问题。此外,PCR方法用于体外定性检测人外周血血浆中septin9基因甲基化,可用于各种肿瘤的临床辅助诊断。
标本类型:全血/组织
检测流程:
(1)PCR反应体系构建(在试剂准备区完成)(2)样本处理及 DNA 提取(在标本制备区完成)→(3)亚硫酸盐转化(在标本制备区完成)→(4)PCR 扩增(在扩增区完成)→(5)结果分析与判定。
其他同类项目:SHOX2基因、RASSF1A基因、SDC2基因甲基化、MGMT基因甲基化、RNF180、her2。
适合开展的医院和科室:肿瘤医院、第三方、各种级别的有需求的医院。
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